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Bio-techne|Luminex 微球数量太少?这三点一定要注意

提及多因子的定量检测,越来越多的小伙伴会第一个想到 Luminex 技术。Luminex 基于微球设计原理,可以在 1 张 96 孔板中定量检测多达 100 种分析物,仅需少量样本,节约时间、经费,可谓一举多得。

R&D Systems® 拥有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 两个产品系列,均基于带有颜色编码的微球,这些微球表面包被了识别不同目标分析物的特异性抗体。当预包被的微球与待检样本孵育时,分析物被微球捕获,经由生物素标记的特异性检测抗体混合物识别,加入链霉亲和素 - PE 荧光素底物后发光并进行定量检测。

01  样品粘稠,未有效稀释
解决方法:测定前,如果是冻存的血清 / 血浆样品,第一步需将样品充分解冻(如果样本包含碎片的话也会影响数据的读取)。建议在加样前,将样本进行 16,000 x g 离心 4 分钟,特殊情况下可能要离心更长的时间,再用 Calibrator diluent 按照建议的稀释比对样本进行稀释。

02  进样针孔堵塞,进样针高度不正确
解决方法:以上两种情况都会导致没有充足的微球进入,前者需用超声的方法清洗针孔,如有需要进行替换;后者需确定进样针的高度并调整至合适位置。

也可以进入维护页面,点击 Cmds&Routines,使用 0。1 N NaOH 运行深度清洗。

03  操作有误,清洗步骤中孔板未附磁力架
解决方法:这是新手常常会出现的失误。对于磁珠形式的微球,切记清洗时整个过程都要附有磁力架,确定磁力架正确地结合在微孔板上,洗板时磁力架应置于微孔板底部,弃去洗涤液前应静置 1 分钟。不要吸干,以防止磁珠丢失。

如果磁珠数量少,建议最好不要用自动洗板机清洗,我们发现自动洗板机清洗可能会造成磁珠聚集,从而影响其数量。

​在实际的 Luminex 实验操作中,有客户经常碰到微球数少于 50 个甚至只有几个的问题,极大地影响了实验结果,其可能的原因和解决方法有哪些呢?

 

如下为正确的手动洗板方式:

 

除了上述三点外,还要一些细节需要注意

●确保仪器已正确校准,建议每周进行仪器校准,每天验证一次。若仪器使用频率不高,则需要在每次实验前进行校准和验证;

●在实验当天使用验证试剂盒确定仪器功能运行正常;

●设定微球收集数(events/microparticle)为 50,并选择正确的微球类型(通常为磁珠),保证微球数量收集充分以获得准确的统计学结果;

●使用 0。12" orbit(3mm 轨道半径)水平微孔板振荡器,确保振荡器速度符合说明书要求。

 

以上文字和图片来源于Bio-techne

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